實(shí)驗(yàn)室分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)核酸或者蛋白樣品濃度常用的工具之一。儀器使用頻繁，但甚少見(jiàn)到有人維護(hù)。其實(shí)，保持分光光度計(jì)清潔、無(wú)污染是成功操作的關(guān)鍵。適合從紫外光區(qū)到可見(jiàn)光區(qū)的測(cè)定，支持單機(jī)、聯(lián)機(jī)2種模式，單機(jī)狀態(tài)下使用機(jī)內(nèi)微機(jī)系統(tǒng)提供熒光強(qiáng)度測(cè)量、濃度直讀、自動(dòng)調(diào)零、自動(dòng)扣除背景等功能，聯(lián)機(jī)狀態(tài)可通過(guò)USB2.0接口使用上層軟件對(duì)儀器進(jìn)行控制和數(shù)據(jù)采集分析。
實(shí)驗(yàn)室分光光度計(jì)測(cè)量條件的選擇：
測(cè)試波長(zhǎng)的選擇
當(dāng)用分光光度計(jì)對(duì)溶液進(jìn)行測(cè)定時(shí)，首先需要選擇合適的測(cè)量波長(zhǎng)。選擇的依據(jù)是該被測(cè)溶液的吸收曲線(xiàn)。在一般情況下，總是選擇較大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)量波長(zhǎng)，這樣可以提高靈敏度。
而在有些情況下較大吸收峰很尖銳、吸收過(guò)大或附近有干擾存在，就不能選較大吸收波長(zhǎng)，而須在保證有一定靈敏度的情況下，選擇吸收曲線(xiàn)中的其它波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定(曲線(xiàn)較平坦處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng))，以消除干擾。繪制吸收曲線(xiàn)是正確選擇波長(zhǎng)的有效手段和方法。
參比溶液和溶荊的選擇
分光光度計(jì)的測(cè)量實(shí)際上是以通過(guò)參比池的光強(qiáng)度作為人射光強(qiáng)度來(lái)測(cè)定試樣的吸光度，先調(diào)節(jié)儀器使透過(guò)參比池溶液的吸光度為零，然后讓同一束光通過(guò)樣品，使得吸光度比較真實(shí)地反映待測(cè)物質(zhì)的濃度，所以參比溶液的選擇非常重要。
如果僅有待測(cè)物質(zhì)與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收，可用純?nèi)軇┗蛘麴s水作參比溶液。如果顯色劑有顏色，并在測(cè)定波長(zhǎng)下有吸收，則用顯色劑溶液作參比溶液，所加人顯色劑及其它試劑的量，與試樣中的加入量應(yīng)一致。
如果樣品中其它組分本身的顏色對(duì)測(cè)定有干擾，而所用顯色劑沒(méi)顏色，則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。
正確選擇合適的溶劑，對(duì)提高分析的準(zhǔn)確度起重要作用。為減小溶劑中雜質(zhì)的影響，應(yīng)選擇高純度的溶劑；溶劑應(yīng)不與待測(cè)物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；待測(cè)物在溶劑中要有一定的溶解度；在測(cè)定的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，溶劑本身沒(méi)有吸收，注意常用溶劑的較短可用波長(zhǎng)；當(dāng)用揮發(fā)性大的溶劑時(shí)，測(cè)量過(guò)程中吸收池應(yīng)加蓋。
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更新時(shí)間：2020-08-27
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